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單克隆抗體鑒定點擊次數(shù):1874 更新時間:2016-04-26

抗體的鑒定

對制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,應(yīng)做下述幾個方面的鑒定:

1.抗體特異性的鑒定   

除用免疫原(抗原)進(jìn)行抗體的檢測外,還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗,方法可用ELISA、IFA法。例如:①制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb,除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外,還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng),以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細(xì)胞因子的單克隆抗體,應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng),其次是與其它細(xì)胞因子間有無交叉。

 

2.McAb的Ig類與亞類的鑒定  

一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行篩選時已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時,如加入適量的PEG(3%),更有利于沉淀線的形成。

 

3.McAb中和活性的鑒定    

用動物或細(xì)胞的保護實驗來確定McAb的生物學(xué)活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細(xì)胞,來觀察動物或細(xì)胞是否得到抗體的保護。

 

4.McAb識別抗原表位的鑒定  

用競爭結(jié)合試驗,測相加指數(shù)的方法,測定McAb所識別抗原位點,來確定McAb的識別的表位是否相同。

 

5.McAb親合力的鑒定 

用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗來確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親合力。

 

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個步驟: 

1、制備抗原。  

2、選擇實驗動物。 

3、動物免疫。  

4、試取血進(jìn)行測試,看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫,殺死實驗動物,采集全部血清。

6、純化出抗體。  

7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。

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